Исследование фосфолипазы из пчелиного яда

Предлагаем вашему вниманию статью на тему: "исследование фосфолипазы из пчелиного яда". В статье собрана и обработана полезная информация, позволяющая полностью раскрыть тему.

Исследование фосфолипазы из пчелиного яда

Химический состав и биологические свойства пчелиного яда

Пчелиный яд представляет собой сиропообразную желтоватую жидкость кислой реакции с приятным медовым ароматом и горько-жгучим вкусом. Он хорошо растворяется в воде, водных растворах глицерина, растительных маслах, хуже — в этиловом спирте различной концентрации и органических кислотах. Он тяжелее воды (относительная плотность 1,085 — 1,131), Содержит 30 — 48% сухих веществ. На воздухе высыхает, но сухой остаток легко притягивает влагу и отсыревает.

Пчелиный яд — довольно устойчивое вещество, однако разрушается концентрированными кислотами (соляной, серной, азотной), едкими щелочами, перекисью водорода и другими окислителями, этиловым спиртом. Солнечные лучи и повышенные температуры очень быстро понижают его физиологическую активность (вплоть до полного разрушения). Он устойчив к действию низких температур, при замораживании и молекулярной сушке (высушивание замороженного продукта в глубоком вакууме) не теряет своей активности.

Пчелиный яд имеет сложный химический состав. В него входят белковые вещества (среди них ряд ферментов), пептиды, аминокислоты, биогенные амины (гистамин, дофамин, норадреналин), производное четвертичного аммониевого основания — ацетилхолин, липиды (жиры и стерины), минеральные вещества, сахара (глюкоза и фруктоза), нуклеиновые, соляная и ортофосфорная кислоты и др. Спорным является вопрос о наличии муравьиной кислоты. Согласно данным С. Шкендерова, 1985, в пчелином яде она практически отсутствует.

Наиболее важными биологически активными соединениями яда являются ферменты, пептиды и биогенные амины.

Среди ферментов наибольшее практическое значение имеют гиалуронидаза и фосфолипаза А. Гиалуронидаза катализирует процесс расщепления гиалуроновой кислоты — сложного углевода, являющегося связующим, «цементирующим» веществом соединительной ткани. Ей принадлежит важная роль в формировании иммунитета организма. Под действием фермента ускоряется расщепление гиалуроновой кислоты оболочек клеток, увеличивается проницаемость стенок кровеносных капилляров, что в конечном счете ведет к снижению сопротивляемости организма к инфекциям.

Гиалуронидаза пчелиного яда — наиболее активная среди подобных ферментов. Она, как и другие белки, теряет свою активность при повышенных температурах. Ее биологическая роль заключается в содействии проникновению пчелиного яда в организм. Фермент способствует ускорению рассасывания гематом, струпьев, шрамов и других соединительно-тканных затвердений, образующихся при заживлении ран и язв. Его применяют при лечении хронических воспалительных процессов матки и фаллопиевых труб, восстановлении проходимости последних.

Важная биологическая роль принадлежит также ферменту фосфолипазе А2 (фосфатид-ацилгидролазе), который ускоряет реакцию отщепления одного остатка жирной кислоты в молекулах фосфолипидов (главным образом фосфатидилхолинов, или лецитинов). В результате этого процесса образуется токсическое вещество — лизофосфатидилхолин, или лизолецитин, который вызывает разрушение (гемолиз) эритроцитов крови, повреждает мембраны клеток и клеточных органелл, понижает свертывающую способность крови, так как разрушает факторы свертывания, в состав которых входят фосфолипиды. Действуя на мембраны митохондрий клеток, лизолецитин нарушает также процесс тканевого дыхания. Проникая в организм, фосфолипаза усиливает воспалительный процесс, вызванный пчелиным ядом.

Молекула фосфолипазы состоит из белковой части, в состав которой входят 183 остатка аминокислот, и небелковой, состоящей из остатков углеводов — фруктозы, галактозы, маннозы и глюкозамина. Как и гиалуронидаза, фосфолипаза может вызвать у чувствительных людей аллергию к пчелиному яду.

Яд содержит также ряд других ферментов. Так, лизофосфолипаза катализирует реакцию превращения лизофосфатидилхолина (лизолецитина) в нетоксическое соединение. Биологические и фармакологические роли кислой фосфатазы, α-гликозидазы и некоторых других ферментов еще достаточно не изучены.

Среди высокоактивных компонентов пчелиного яда, определяющих эффективность его лечебного действия, важное место принадлежит группе пептидов. Пептидами называют фрагменты белковых молекул, состоящие из остатков аминокислот, соединенных так называемой пептидной связью. Из пептидов пчелиного яда наиболее высокой биологической активностью обладают мелитин, апамин, пептид 401 (МСД-пептид), адолапин, протеазные ингибиторы, секапин, терциапин и др.

Молекула мелитина состоит из 26 остатков аминокислот, среди которых, найдены лизин, аргинин, треонин, серии, пролин, глицин, глютаминовая кислота, аланин, валин, лейцин, изолейцин, триптофан. Попадая в организм человека и животных, мелитин в больших дозах вызывает гемолиз (разрушение) эритроцитов крови и спазмы гладких мышц кровеносных сосудов и внутренних органов.

Мелитин понижает поверхностное натяжение, что влечет за собой разрушение мембран эритроцитов и лейкоцитов крови, нарушение структуры клеточных органелл — лизосом и митохондрий. При этом ухудшается доставка кислорода тканям, возникает их кислородное голодание. В результате разрушения клеточных мембран освобождаются биогенные амины серотонин и гистамин, которые способствуют развитию воспаления, повышается проницаемость стенок кровеносных капилляров, расширяются сосуды, снижается артериальное давление, расслабляются спазмы бронхов. Исследования последних лет показали, что развитие воспалительного процесса под влиянием больших доз мелитина обусловлено увеличением синтеза в организме гормоноподобных веществ простагландинов, особенно одного из их видов — простациклина, расширяющего кровеносные сосуды и задерживающего образование тромбов. Угнетая активность тромбопластина и вызывая денатурацию фибриногена, мелитин уменьшает свертывающую способность крови.

Доказано, что этот пептид обладает выраженным противомикробным действием, затормаживая рост грамположительных микроорганизмов.

Установлено, что введение пчелиного яда в организм усиливает выработку гормонов гипофиза и надпочечных желез. Увеличивается прежде всего продукция кортизола, кортизона и других гормонов коркового слоя надпочечников, оказывающих энергичное противовоспалительное действие. Это действие обусловлено прежде всего мелитином и объясняет эффективность применения пчелиного яда в качестве противовоспалительного средства, наиболее эффективного при лечении ревматизма и полиартритов.

Следует подчеркнуть, что особенности действия мелитина зависят от его количества: в малых дозах (0,05 — 2 мкг/мл) он стабилизирует мембраны лизосом лейкоцитов и оказывает выраженный противовоспалительный эффект, тогда как введенный в значительно больших дозах (10 мкг/мл) разрушает клеточные мембраны, повышает проницаемость сосудов и способствует развитию воспаления (С. Шкендеров, 1985). Под влиянием малых доз мелитина (10 — 30 мкг/кг) увеличивается выработка в печени высокоактивного гормоноподобного вещества — циклического аденозинмонофосфата, который стимулирует работу желез внутренней секреции.

В последнее время было также обнаружено, что мелитин повышает устойчивость животных к рентгеновским лучам, проявляя таким образом лучезащитное действие. В больших дозах (4 — 6 мг/кг) это вещество является токсичным: угнетает центральную нервную систему, резко повышает кровяное давление, вызывает глубокие нарушения работы сердца (мерцательную аритмию и др.), которые могут привести к смертельному исходу.

Важная биологическая роль принадлежит и другому пептиду — апамину, молекула которого состоит из 18 остатков аминокислот — лизина, гистиди-на, аргинина, треонина, пролина, аланина, цистина, лейцина, глютаминовой и аспарагиновой кислот. В отличие от других пептидов пчелиного яда апамин содержит серу. Особенностью его действия на организм является сильное возбуждение нервной системы, которое при поступлении больших доз яда может приводить даже к судорогам.

Читайте так же:  Почему пчелиный яд является лекарством

Апамин — токсическое вещество. Исследования последних лет показали, что он нарушает передачу нервных импульсов, усиливает возбуждение и угнетает процессы торможения в центральной нервной системе. Под влиянием апамина увеличивается производство биогенных аминов — норадреналина, дофамина и серотонина, которые оказывают возбуждающий эффект прежде всего на гипоталамическую область и кору головного мозга. Апамин активизирует функцию желез внутренней секреции — гипофиза и надпочечников. При внутривенном введении пептида животным у них увеличивается содержание в крови гормонов надпочечных желез — адреналина, кортизола и кортизона. Повышается кровяное давление. Перечисленные гормоны оказывают мощный противовоспалительный эффект. Так же, как и мелитин, апамин подавляет иммунную систему организма.

Пептид 401 (МСД-пептид) во многом действует подобно апамину. Он способствует выделению в свободном виде в организме биогенных аминов гистамина и серотонина, обладающих активным многосторонним биологическим действием. Гистамин является продуктом преобразования (декарбоксилирования) аминокислоты гистидина. Он встречается в тканях обычно в связанном состоянии, расширяет кровеносные сосуды, понижает кровяное давление. При избыточной его продукции в организме может наступить шоковое состояние.

Серотонин — гормон, образующийся из аминокислоты триптофана. Он играет важную роль в сложных процессах возбуждения, торможения, превращения одного вида энергии в другой в центральной нервной системе, является так называемым медиатором, способствующим передаче возбуждения от одной нервной клетки к другой. Серотонин оказывает противосудорожное действие, обладает выраженным защитным эффектом от ионизирующей радиации, вызывает сужение просвета мелких артерий — артериол, повышает кровяное давление. Он усиливает перистальтику кишечника, способствует свертыванию крови.

Пептид 401 повышает проницаемость стенок кровеносных капилляров, возбуждает центральную нервную систему, проявляет отчетливо выраженное противовоспалительное действие, при внутривенном введении понижает кровяное давление. Пептид 401 эффективен в очень малых дозах. При повышении дозировки действует токсически.

Малоизученный пока пептид адолапин — единственный из всех компонентов пчелиного яда оказывает болеутоляющее действие, препятствует агрегации (склеиванию) эритроцитов крови, а следовательно, принимает участие в предупреждении и лечении тромбоза сосудов.

Пептиды секапин и терциапин проявляют успокаивающее действие; противовоспалительной активности они лишены.

Содержание минеральных соединений в пчелином яде составляет 3 — 4% (на абсолютно сухое вещество). Основное место принадлежит магнию, найдены также соединения калия, фосфора, кальция, железа, цинка, меди, серы и некоторых других элементов.

Таким образом, пчелиный яд представляет собой вещество, оказывающее сложное и многостороннее физиологическое и лечебное действие.

Исследование фосфолипазы из пчелиного яда

Практическое пчеловодство (9)

НОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПО ПЧЕЛИНОМУ ЯДУ

В ФЕДЕРАТИВНОЙ РЕСПУБЛИКЕ ГЕРМАНИИ

В последние годы в ФРГ ис­следованием .пчелиного яда занима­лись три института, а именно: Фар-макоголичеюний институт Гиесенаш-го Университета (ГАБЕРМАНН и сотр.); Институт экспериментальной медицины имени Маиса Планка в Геттингене (ЙЕНТШ и сотр.) и Ин­ститут органической химии Технического факультета в Дармштадте (ГАБЕРМЕЛЬ). Последний указывает, что за прошедшие 10 лет био­логическая химия натуральных продуктов больше чем когда-либо нахо­дится в центре внимания, что многие рабочие коллективы, главным образом, в США и Японии, занимаются этими вопросами, и что яд вырабатываемый и содержащийся в животных интенсивно последуют по экологическим причинам. Он сравнивает химический состав разных ядов животных и отмечает, что яды родственных животных могут сильно различаться. Так, например, яд скорпионов (Buthus eccitanus) из се­веро-западной Африки почти смертелен, в то время как у скорпиона се­верного побережья Средиземного моря он практически безвреден. Может быть здесь можно провести параллель с Apis mellifera adansonii афри­канской пчелой «убийцей» ?

ЙЕНТШ занимался изучением фосфолипазы А, содержащейся в пчелином яде. Он провел сравнение между фосфолипазой яда пчелы и змеи. Оказалось, что энзимы пчелиного яда в 30 раз активнее, чем змеиного. Фосфолипаза А пчелиного яда катализирует гидролиз эфира жирной кислоты, причем из лецитина образуется изолецитин и один моль жирной кислоты. При помощи дискового электрофореза ЙЕНТШ установил, что существуют три составных вещества фосфолипазы А пчелиного яда, находящихся в соотношении 65 : 30 : 5. Первые два обла­дают энзиматической активностью.

Вместе с СПОЕРРИ и ГЛЕЕСОМ он опубликовал материал об апамине, оказывающем нейротоксический эффект на центральную нер­вную систему и приводит к некоординированной гнпермоторпке. Куль­туры, полученные из коры головного мозга эмбрионов мышей, смешан­ные с апамином модифицируются, отмечается деформирование нейронов.

ГАБЕРМАНН исследовал новый пептид (МКД) пчелиного яда, который недавно стали называть Р-401 и который в отличие от мели-ттина и фо’сфолинавы А содержицся в меньшем количестве т пчелином

Опубликовано 23 Март 2010 в рубрике Исторические статьи

Лечение пчелиным ядом

1. Пчелиный яд, его состав и свойства

1. Пчелиный яд является старинным народным лечебным средством. Еще в глубокой древности он применялся во многих странах Европы и Азии. В ряде районов СССР до сих пор широко распространено это народное средство.

Пчелиный яд представляет собой продукт секреторной деятельности специальной железы в теле рабочей пчелы. Перед ужалением он накапливается в особом мускулистом резервуаре, открывающемся в сложно устроенное жало, с помощью которого яд вводится в тело. При ужалений пчела ударом брюшка вонзает острие жала, которое благодаря своим зазубринкам зацепляется за волокно кожи. Ритмически сокращаясь, мускулатура жала проталкивает его все глубже и глубже в кожу, одновременно нагнетая яд через канал жала в ранку. При попытке пчелы улететь жалящий аппарат ее вместе с резервуаром яда, ядовитой железой и последним узлом брюшной нервной цепочки отрывается от ее брюшка и остается в коже, причем мускулатура жала продолжает сокращаться, а яд нагнетаться в тело вплоть до полного исчерпывания его запаса (от 0,2 до 0,3 мг).

2. Пчелиный яд представляет собой бесцветную очень густую жид- кость кислой реакции, быстро твердеющую на воздухе, с удельным весом 1,131, с высоким содержанием сухого остатка (до 41°/о). Нормальность кислот яда колеблется от 0,38 до 1,44 (в среднем 0,66); рН водных раст- воров яда лежит в пределах 4,5-5,5. При высушивании яда он теряет вместе с водой и часть (до 25%) своих летучих кислот. Пчелиный яд обладает высокой поверхностной активностью.

Минеральная фракция пчелиного яда очень своеобразна. Спектрографическое исследование золы пчелиного яда показало присутствие в ней магния (до 0,4°/о нативного яда) и небольших количеств меди. Другие металлы, широко распространенные в биологических объектах, как то: натрий, калий, железо и другие в пчелином яде не обнаружены.

Во фракции свободных органических кислот и аминов был найден гистамин (до 1%) и значительное количество органических кислот.

Липоидная фракция яда невелика, к ней надо отнести пахучее вещество, извлекаемое эфиром, а также стерины, экстрагируемые хлороформом.

Читайте так же:  Рецепт молоко лук мед

Углеводов пчелиный яд не содержит.

Белковая фракция образует основную массу сухого вещества пчелиного яда. Фармакологическая активность и, вероятно, терапевтическое действие связаны именно с ней. Белки яда удалось разделить с помощью электрофореза на бумаге, причем были получены 3 фракции.

Фракция 0 еще недостаточно изучена.

Фракция I представляет собой токсический белок неферментной природы с молекулярным весом около 35 000; с ним связаны многие фармакологические свойства пчелиного яда: способность вызывать «прямой» гемолиз, давать сокращение (контрактуру) гладких и поперечно-полосатых мышц, вызывать падение кровяного давления периферического происхождения, блокировать (парализовать) центральные и периферические нервно-мышечные синапсы, воздействовать на стенки кровеносных сосудов, вызывать местное воспалительное действие и т. д. Есть основания думать, что этот компонент наиболее ценен с терапевтической точки зрения. Он был назван мелиттином.

Фракция II имеет более сложный состав: в ней обнаружено присутствие двух ферментов: гиалуронидазы и фосфолипазы А. Гиалуроиидаза, растворяя основное вещество соединительной ткани, обеспечивает распространение яда в коже и усиливает местное действие яда. Фосфолипаза А расщепляет лецитин с образованием токсического продукта лезоцитина, способного оказывать цитологическое действие и «непрямой» гемолиз. Видимо, с этим компонентом связаны такие важные эффекты фракции II, как угнетение (инактивация) деятельности тканевых дегидраз и тромбо-киназы. Последнее объясняет понижение свертываемости крови под влиянием пчелиного яда.

Разные компоненты яда неодинаково относятся к действию различных разрушительных внешних воздействий. Так, высокая температура разрушает ферменты яда, в частности гиалуронидазу и фосфолипазу А, но не действует на мелиттин; этот белок очень термостабилен. Он также не разрушается в сильнокислой среде, но. менее устойчив в щелочной. Окислители снижают активность яда. Протеолитические ферменты, пепсин и трипсин, полностью инактивируют яд, расщепляя его белки, что является важным доказательством белковой природы активных начал пчелиного яда.

При стоянии в водном растворе (в разведении от 1 : 100 до 1 : 1000) яд постепенно инактивируется. Пчелиный яд, по данным некоторых авторов, обладает бактерицидным и бактериостатическим свойствами, которые проявляются только по отношению к некоторым патогенным микробам.

3 Действие пчелиного яда на организм человека сложное. Оио зависит от дозы яда, от места ужаления и от особенностей организма, в частности от его индивидуальной чувствительности.

При нормальной средней чувствительности человека единичные ужаления вызывают только местную кожную воспалительную реакцию. Несколько десятков ужалений уже дают общее заболевание, которое, правда, быстро проходит и не связано с появлением каких-либо тяжелых симптомов. 100-200 ужалений, полученных одновременно, вызывают тяжелое заболевание, в результате которого пострадавший несколько дней вынужден лежать в постели. При этом в первое время после ужалений человек испытывает головокружение, тошноту, слюнотечение и обильное потоотделение, затем у него развивается рвота, понос и мочеиспускание, и он может потерять сознание. Кровяное давление снижается, происходит сгущение крови. Позднее повышается температура, наблюдаются признаки гемолиза и гемоглабинурии. Смертельной дозой яда для взрослого человека считают 500 ужалений. Женщины и дети более чувствительны к пчелиному яду, чем мужчины.

4. Однако чувствительность организма человека к пчелиному яду крайне изменчива. При систематическом введении пчелиного яда, как это имеет место у пчеловодов, у многих из них развивается высокая резистентность к яду, так называемый «иммунитет» пчеловодов. Однако природа этого состояния очень сложна и еще не выяснена.

Так как пчелиный яд представляет собой аллерген, то иногда у человека развивается типичное аллергическое повышение чувствительности к яду. Это состояние может проявляться в форме следующих аллергических реакций, которые могут развиться вследствие одного или немногих пчелиных ужалений: 1) в форме усиления местной воспалительной реакции; 2) в форме приступа крапивницы или астматических явлений, которые могут продолжаться несколько часов; 3) в форме типичного анафилактического шока. Поэтому перед началом лечения пчелиными ужалениями необходимо у каждого больного проверить чувствительность к пчелиному яду.

5. Лечебное действие пчелиного яда очень разносторонне. Пчелиный яд обладает лечебными свойствами в малых дозах. В отличие от других лекарственных средств для пчелиного яда характерна большая разница между лечебной, токсической и смертельной дозами. Токсическая доза пчелиного яда в десятки раз, а смертельная — в сотни раз больше средней лечебной дозы. При употреблении лечебных доз яда его токсическое действие на организм больного наблюдается крайне редко.

Терапевтическое значение имеет как общее, так и местное действие яда. Пчелиный яд расширяет артерии и капилляры, увеличивает приток крови к больному органу и уменьшает болевой синдром. Температура кожи в области воздействия яда быстро повышается на 2-4—6° против нормы.

Клиницисты отмечают также, что пчелиный яд благотворно действует на кроветворную систему: повышается количество гемоглобина, увеличивается как местный, так и общий лейкоцитоз, уменьшается вязкость и свертываемость крови. Пчелиный яд действует на сердечную мышцу, снижает повышенное кровяное давление, влияет на обмен веществ, в частности уменьшается количество холестерина крови, играющего определенную роль в происхождении атеросклероза. Повышается диурез, увеличивается выделение азота.

Пчелиный яд оказывает благотворное влияние на общее состояние больного, повышается общий тонус и работоспособность; улучшаются сон и аппетит.

II. Показания для применения апитерапии

Пчелиные ужаления применяются, в основном, при следующих заболеваниях:

1.Ревматические заболевания (ревматические полиартриты, ревматические заболевания мышц, ревмокардит).

2.Неспецифические инфекционные полиартриты.

4.Заболевания периферической нервной системы (пояснично-крестцо-вый радикулит, воспаление седалищного нерва, а также бедренного, лицевого и других нервов, межреберные невралгии, полиневриты и др.).

5.Трофические язвы и вяло гранулирующие раны.

6.Сосудистые хирургические заболевания (тромбофлебиты без гнойного процесса, эндартериоз, атеросклеротическое поражение сосудов ко-, нечностей).

7. Воспалительные инфильтраты (без нагноения).

10.Гипертоническая болезнь I и II стадии.

11. Ириты и иридоцнклиты.

Кроме того, некоторые авторы включают в число показаний тиреотоксикозы I и II стадии, симптомокомплекс Меньера и другие заболевания.

III. Противопоказания для применения пчелиных ужалений следующие:

1. Идиосинкразия к пчелиному яду.

5.Болезни печени и поджелудочной железы в стадии обострения.

6.Заболевания почек, особенно связанных с гематурией.

7. Заболевание коры надпочечников и, в частности, Аддисоиова болезнь.

8.Сепсис и острогнойные заболевания.

9.Декомпенсация сердечно-сосудистой системы.

10.Органические заболевания центральной нервной системы.

11.Общее истощение организма.

Видео удалено.
Видео (кликните для воспроизведения).

12. Болезни крови я кроветворной системы с наклонностью к крово- течениям.

Некоторые авторы предостерегают от применения яда при беременности.

IV. Методика апитерапии

После всестороннего клинического обследования больного производят определение чувствительности к пчелиному яду. Для этого перед началом лечения необходимо провести ие менее двух биологических проб. Первая проба заключается в том, что иа кожу поясничной области приставляется для ужаления одна пчела, жало извлекается через 10-15 секунд. На следующий день проверяется моча на белок и сахар. На второй день производится вторая проба: на кожу поясничной области также приставляется одна пчела, но жало извлекается через 1 минуту. На следующий день — вторая проверка на белок и сахар.

Читайте так же:  Орешки с медом в банке рецепт

Если после двух биологических проб в моче не появится белок и сахар и не будет резко выраженной аллергической реакции или общих явлений отравления, описанных выше, то можно начинать апитерапию, предварительно проведя больному все необходимые клинические исследования.

Лечение следует проводить по циклам. Цикл лечения состоит из 10- 12-15 процедур ужалений пчелами либо ежедневно в течение 10-15 дней, либо 2 раза в неделю в течение полутора месяцев. После проведенного цикла лечения назначается перерыв на 1,5-2 месяца. Затем при соответствующих показаниях лечение повторяется.

Место ужалений и их количество зависят от заболевания.

При ревматическом неспецифическом инфекционном полиартрите и при деформирующем спондилоар грозе пчелы приставляются в области пораженных сосудов и по ходу позвоночника. В первые процедуры ставится 2-4-6 пчел, а затем при отсутствии отрицательных явлений 10- 15-20 пчел за процедуру.

При заболеваниях периферической нервной системы пчелы приставляются по ходу поражения нервов, а при пояснично-крестцовом радикулите, кроме того, на пояснично-крестцовую область. Количество пчел не должно превышать 8-12 за процедуру.

При эндартериозе и атеросклеротическом поражении сосудов конечностей пчелы приставляются на ходу сосудов больной конечности и на пояснично-крестцовую область. Число ужалений 8-12 за процедуру.

При гипертонической болезни пчелы приставляются к конечностям не более 4 за процедуру два раза в неделю (ежедневные процедуры не рекомендуются).

При тромбофлебитах ужаления производятся над тромбированными венами, число их также не должно превышать 8-12 за процедуру.

При трофических язвах и вяло гранулирующих ранах пчелы приставляются в 5 см от раны или язвы, а также по ходу главной чувствительной ветви нерва данной области. Количество ужалений не более 5-8 за процедуру.

При иритах и иридоциклитах ужаления производятся в височных областях по 2-4 на сеанс. Некоторые авторы рекомендуют при этом ужаления в закрытые веки (до 6 пчел за процедуру), но эта процедура опасна вследствие возможности повреждения глаза через веко.

При тиреотоксикозе ужаления производятся над щитовидными железами не более 2-4 за процедуру.

Женщинам и лицам пожилого возраста количество ужалений обычно сокращается. Детям до 15 лет число ужалений должно быть сокращено соответственно возрасту ребенка.

После каждого ужаления во время лечебных процедур жало удаляется через 1 минуту. Общее количество ужалений на цикл лечения не должно превышать 200-250.

В некоторых случаях апитерапяю целесообразно сочетать с медика-ментозным лечением, а также С физиотерапевтическими процедурами а лечебной гимнастикой.

Для осуществления ужаления пчела берется за спинку пальцами или пинцетом и приставляется брюшком к намеченному месту.

При соблюдении всех требований настоящей инструкции лечение апитоксином может производиться как в стационарных, так и в амбулаторных условиях.

V. Осложнения и борьба с ними

Лечение ужалениями пчел необходимо проводить под контролем лабораторных исследований крови и мочи. При появлении патологии е моче и крови лечение пчелиным ядом следует прекратить.

При появлении аллергических реакций рекомендуют адреналин, хлористый кальций, бромистый натрий.

Некоторые авторы рекомендуют при появлении признаков отравления пчелиным ядом в качестве противоядия 40-процентный спирт 20-25 г на прием. Однако целесообразность применения этого средства еще требует проверки.

Временную инструкцию по применению пчелиного яда (АПИТЕРАПИЯ — лечение пчелиным ядом) в виде пчелиных ужалений, утвержденную Ученым Медицинским Советом Министерства здравоохранения СССР от 10 мая 1957 г., считать утратившей силу.

Фосфолипазы, их классификация и свойства (стр. 2 из 7)

Опосредование гормонального сигнала системой фосфолипаза С—инозитол-3-фосфат.

Образование гормон-рецепторного комплекса при участии регуляторного G-белка активирует мембранную фосфолипазу С, вызывающую гидролиз фосфолипидов мембраны с образованием двух вторичных посредников: инозитол-3-фосфата и диацилглицерола. Инозитол-3-фосфат ведет к выходу Са2+ из внутриклеточных депо. Связывание ионизированного кальция со специализированным белком кальмодулином активирует протеинкиназы и вызывает фосфорили-рование внутриклеточных структурных белков и ферментов. Диацилглицерол повышает сродство протеинкиназы С к Са2+, способствуя ее активации, что также завершается процессами фосфорилирования белков. Диацилглицерол одновременно реализует другой путь опосредования гормонального эффекта, активируя фосфолипазу А2 и образование простаноидов.

Гормонрецепторный комплекс с участием регуляторного G-белка ведет к активации мембранного фермента фосфолипазы С, вызывающей гидролиз фосфолипидов мембраны с образованием двух вторичных посредников: инозитол-3-фосфата и диацилглицерола. Инозитол-3-фосфат вызывает выход Са2+ из внутриклеточных депо, в основном из эндоплазматического ретикулума, ионизированный кальций связывается со специализированным белком кальмодулином, что обеспечивает активацию протеинкиназ и фосфорилирование внутриклеточных структурных белков и ферментов. В свою очередь диацилглицерол способствует резкому повышению сродства протеинкиназы С к ионизированному кальцию, последний без участия кальмоду-лина ее активирует, что также завершается процессами фосфорилирования белков.

Диацилглицерол одновременно реализует и другой путь опосредования гормонального эффекта за счет активирования фосфолипазы А2. Под влиянием последней из мембранных фосфолипидов образуется арахидоновая кислота, являющаяся источником мощных по метаболическим и физиологическим эффектам веществ — простагландинов и лейкотриенов. В разных клетках организма превалирует один или другой путь образования вторичных посредников, что в конечном счете и определяет физиологический эффект гормона. Через рассмотренную систему вторичных посредников реализуются эффекты адреналина (при связи с альфа-адренорецептором), вазопрессина (при связи с V-1-рецептором), ангиотензина-И, соматостатина, окситоцина.

2. Фосфолипазы А2

2.1 Общие сведения (реакция, открытие, строение)

Фосфолипаза А2 (К.Ф.3.1.1.4.) – фермент, катализирующий отщепление остатка жирной кислоты — лецитин, кефалин — от фосфолипидов, превращая их в токсичные соединения, сильно уменьшающие поверхностное натяжение. Эти соединения растворяют эритроциты и другие, клеточные и субклеточные структуры и поэтому его называют лизолецитинами и лизокефалинами

В молекуле фосфолипидов фосфолипаза пчелиного яда отщепляет жирную кислоту со второго места в молекуле и поэтому ее называют фосфолипазой А2. Она известна с 1897 года (Лангер) как фактор, усиливающий гемолитическую активность пчелиного яда после добавления лецитина. Фосфолипаза является наиболее исследованным энзимом пчелиного яда. Как пищеварительный фермент фосфолипаза была открыта в 1900 году. Сейчас очевидно, что фосфолипаза А2 (ФЛА2) – больше чем пищеварительный фермент. Она широко распространена и присутствует в большинстве клеток и тканей млекопитающих, выполняя функции регулятора метаболизма, поддержания мембранного гомеостаза, образования предшественников эйкозаноидов.

В зависимости от молекулярной массы, клеточной локализации и присутствия ионов Са2+ различают цитозольные ФЛА2, секреторные и Са-независимые ФЛА2 или ФЛА2 внешней мембраны.

ФЛА2 включают несколько не связанных белковых семейств с общей ферментативной активностью. Два наиболее важных семейства — это секретируемые и цитозольные фосфолипазы А2.

Внутриклеточные фосфолипазы, также как и внеклеточные, относятся к кальций-зависимым ферментам. Структурно, однако, они сильно отличаются от секретируемых фосфолипаз. Как правило, они значительно крупнее (более 700 аминокислот) и содержат C2 домен, который направляет фермент к клеточной мембране. Эти фосфолипазы в основном участвуют в клеточных сигнальных путях, таких как воспалительная реакция. Под действием ФЛА2в клетке может образовываться арахидоновая кислота, предшественник эйкозаноидов, таких активных сигнальных молекул как лейкотриены и простагландины.

Читайте так же:  Кролик с медом рецепт

ФЛА2 внешней мембраны:

Грам-отрицательные бактерии содержат на внешней мембране ФЛА2 с широким спектром специфичности. В кишечной палочке (Escherichia coli) этот фермент участвует в выбросе токсина бактериоцина из клетки за счёт повышенной проницаемости мембраны при увеличении уровня лизофосфолипидов и жирных кислот в мембране.

Экстраклеточные формы фосфолипаз были выделены из различных ядов змей, пчёл и ос. Они также находятся во всех тканях млекопитающих и в бактериях. Активность этих фосфолипаз требует наличия кальция.

Фосфолипаза А2 пчелиного яда во внеклеточном пространстве вблизи липидного бислоя. Полярные группы фосфолипидов находятся между жёлтой и красной плосткостями. Неполярные ацильные цепи — между красной и чёрной плоскостями.

Панкреатическая фосфолипаза относится к ферментам пищеварения и участвует в переваривании липидов пищи. Фосфолипазы яда участвуют в обездвиживании жертвы за счёт лизиса её клеток.

2.2 Классификация и свойства

2.2.1 Цитозольные ФЛА2

История цитозольных фосфолипаз группы А2 началась в 1991 г., когда из цитозоля различных клеток животных был выделен и клонирован белок молекулярной массой 85 кДа, который кроме молекулярной массы отличался от известных к тому времени фосфолипаз отсутствием дисульфидных мостиков и чувствительностью к кальцию. Позже скрининг нуклеотидных баз позволил найти ещё два паралога – cPLA2b и cPLA2g. Первый из найденных белков получил название cPLA2a. Называясь «цитозольным», фермент действует тем не менее на мембранах цитоплазматического ретикулума и ядра. Эта изоформа ФЛА2 присутствует во многих клетках и тканях: мозге, почках, селезенке, легких, макрофагах, нейтрофилах, альвеолярных эпителиальных клетках и др. Фермент становится активным в результате фосфорилирования митоген-активируемыми протеинкиназами и протеинкиназой С. Различные внеклеточные цитокины, митогены, гормоны, нейромедиаторы, факторы роста, антигены, эндотоксины, а так же определенные физические и стрессовые воздействия, включая ультрафиолетовый свет и оксидативный стресс, индуцируют активацию и синтез цитозольной ФЛА2.

Основной особенностью этого изотипа фермента является то, что он наиболее активно гидролизует фосфолипидные субстраты, содержащие во втором положении арахидоновую кислоту. Такая субстратная селективность и определяет основную функцию фермента в клетке.

Паралоги цитозольной ФЛА2 описаны совсем недавно и сведения об их свойствах ограничены. Известно, что белок cPLA2g не содержит кальцийсвязывающего домена и не зависит от ионов Ca2+; имеет всего 29 % сходства с аминокислотной последовательностью белка cPLA2a. Он связан с мембраной за счёт пальмитинового сайта и проявляет в основном изофосфолипазную активность. Показано его участие в развитии апоптоза макрофагов. Белок cPLA2b имеет кальцийсвязывающий домен, но также проявляет преимущественно свойства ФЛА1, т.е. гидролизует связь sn-1.

Фермент cPLA2a – единственная на сегодняшний момент фосфолипаза, которая специфична к арахидоновой кислоте и предпочитает субстраты, локализованные в мембране, а не находящиеся в мономерной форме в растворе. Возможно, эти свойства можно объяснить существованием амфифильной «крышки» (аминокислотные остатки 413-457), которая предотвращает вход жирнокислотного остатка фосфолипида в туннель активного центра в случае, если белок не локализован на мембранах. «Крышка» открывается при взаимодействии белка с анионными липидами мембраны. Межфазный катализ, осуществляемый этим ферментом, интенсивно изучается.

Открытие цитозольной ФЛА2 в конце 1980-х гг. дало толчок к изучению регуляции синтеза эйкозаноидов в организме при остром ответе на различные провоспалительные стимулы. Регуляция секреторной фосфолипазы происходит на уровне её экспрессии, а активность цитозольной фосфолипазы в клетке регулируется также на уровне активности фермента. Основными факторами, влияющими на активность цитозольной фосфолипазы являются концентрация внутриклеточного Са2+ и фосфорилирование этого фермента протеинкиназами. Концентрация ионов Са2+ и активность различных протеинкиназ в клетке являются весьма лабильными параметрами, изменяющимися в течение нескольких секунд после связывания лигандов — агонистов с соответствующими клеточными рецепторами, что позволяет эффективно регулировать в клетке продукцию арахидоновой кислоты и соответственно синтез эйкозаноидов.

Пчелиный яд

Пчелиный яд — вещество, вырабатываемое некоторыми особыми железами, расположенными в брюшной полости пчелы. Это прозрачная водная жидкость с острым, горьким вкусом и ароматным запахом (сопоставимым с ароматом спелых бананов), явно кислотным веществом.

Он легко растворяется в воде и кислотах, почти нерастворим в спирте. Содержит 30% твердого материала. Яд быстро высыхает при комнатной температуре. Превращается в липкое вещество без потери вирулентности. Он очень термостойкий, он выдерживает температуру 100 ° C в течение десяти дней без потери мощности. Чистый пчелиный яд оказывает мощный противовоспалительный эффект, поэтому часто используется в составе медикаментозных препаратов направленного действия, а также при лечении апитерапией.

С незапамятных времен пчелиный яд (апитоксин) применялся для лечения различных заболеваний. Если использовать пчелиный яд правильно по назначению врача, то он эффективно справляется с лечением многих заболеваний. Но применение пчелиного яда требует осторожности, учета всех показаний и противопоказаний.

Состав пчелиного яда

Химический состав пчелиного яда сложен. Внешне это пахучая прозрачная слегка вязкая жидкость жгуче-горьковатая на вкус. Апитоксин устойчив к воздействию внешних факторов: высокой и низкой температуры, кислот и щелочей. В организме человека разрушается от влияния пищеварительных соков. Быстро высыхает, сохраняя при этом все свои свойства.

Высушенный пчелиный яд

Большинство компонентов в составе пчелиного яда оказывает активное воздействие на организм. Вот из чего состоит пчелиный яд: ферменты, низкомолекулярные белковые частицы, нейромедиаторы, макро- и микроэлементы и некоторые другие компоненты. Действие всех компонентов взаимосвязано, лечебные эффекты их органически дополняет друг друга.

Состав пчелиного яда

Состав пчелиного яда — это в основном белки адолапин и мелитин, которые оказывают мощное противовоспалительное действие. Для сравнения, популярный гидрокортизон в сотню раз менее эффективен и при этом обладает рядом побочных реакций, которых лишен пчелиный яд. Мелиттин, наиболее распространенное вещество, является одним из наиболее эффективных противовоспалительных агентов (в 100 раз более сильным, чем гидрокортизол). Адолапин является еще одним сильным противовоспалительным веществом и ингибирует циклооксигеназы, он обладает обезболивающей активностью. Апамин блокирует кальций-зависимые калиевые каналы, тем самым усиливая передачу нервного импульса. Другие вещества, такие как, гиалуронидаза, фосфолипаза А2, гистамин и дегранулирующий белок, участвуют в подавлении воспалительной реакции с размягчением ткани и облегчением потока других веществ. Именно поэтому пчелиный яд широко используется для лечения заболеваний иммунной и нервной систем, а также болезней инфекционного и вирусного происхождения.

Ферментный состав апитоксина

Ферменты – это сложные белки с высокой молекулярной массой, ускоряющие окислительно-восстановительные реакции, входящие в обмен веществ. В состав пчелиного яда входят:

Читайте так же:  Настойка из алоэ меда и кагора рецепт

Гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту, являющуюся составной частью межклеточного вещества соединительной ткани; это снижает вязкость ткани и увеличивает ее проницаемость для любых средств, в том числе для токсинов пчел. Снимает отеки, сглаживает рубцы на коже, спайки во внутренних органах, восстанавливает объем движений в суставах, предупреждает развитие контрактур (стойких нарушений движения). Вызывает сенсибилизацию (аллергизацию) организма.

Фосфолипаза А2

Фосфолипаза А2 – разрушает фосфолипиды, входящие в стенки мембран клеток, что приводит к их разрушению. Страдают в первую очередь эритроциты, происходит гемолиз крови. При правильно подобранной дозировке предупреждает образование тромбов, но оказывает выраженное токсическое воздействие на организм.

  • Фосфолипаза В –частично нейтрализует токсическое действие фосфолипазы А2.
  • Кислая фосфотаза – фермент, вызывающий дополнительную сенсибилизацию.
  • Белковый состав пчелиного яда

    Белковый состав апитоксина делится на нулевую, первую и вторую фракции:

    1. Нулевая фракция содержит биологически неактивные белки, состав их до сих пор полностью не изучен; не оказывает никакого действия на организм;
    2. Первая фракция содержит 13 аминокислот и активные пептиды:
      • мелиттин

    пептид мелиттин — основное действующее вещество апитоксина; при попадании в кровь он мгновенно расширяет кровеносные сосуды, разрушает эритроциты (гемолиз), предупреждает образование тромбов, вызывает раздражение тканей, воспалительную реакцию и активизацию иммунитета; мелиттин стимулирует нервную деятельность;

  • апамин – пептид, потенцирующий (усиливающий) действие мелиттина на нервную систему; повышает артериальное давление (АД); за счет стимуляции выработки кортизола оказывает противовоспалительный эффект; не сенсибилизирует организм;
  • МСД-пептид (пептид-401) – потенцирует некоторые свойства мелиттина (повышение проницаемости сосудов, воздействие на нервную систему), оказывает мощное анестезирующее и противовоспалительное действие.
  • адолапин – пептид с анестезирующими и противовоспалительными свойствами;
  • кардиопептид — поддерживает функцию системы кровообращения.
    1. Вторая фракция содержит 18 аминокислот и оказывает умеренное действие на организм. Но содержит ферменты, вызывающие гемолиз (фосфолипазу А2) и повышающие проницаемость кровеносных сосудов (гиалуронидазу).

    Что еще содержит пчелиный яд

    Состав пчелиного яда разнообразен. Кроме ферментов и пептидов в него входят:

      нейромедиаторы

    нейромедиаторы – вещества, передающие нервные импульсы по нервным клеткам (нейронам):

    • гистамин – вызывает аллергические реакции, мгновенно расширяет кровеносные сосуды, повышает их проницаемость, вызывает аллергический отек тканей, снижает АД;
    • ацетилхолин – расширяет кровеносные сосуды, осуществляет передачу нервных импульсов с нейронов на мышечные клетки; способствует восстановлению двигательной функции после перенесенного инсульта;
  • органические (муравьиная) и неорганические (фосфорная, соляная) кислоты;
  • летучие ароматические вещества;
  • макро- и микроэлементы; к макроэлементам относятся калий, магний, кальций, натрий, фосфор и хлор, к микроэлементам – медь, марганец и сера.
  • Действие пчелиного яда на организм человека

    Действие пчелиного яда на организм человека многогранно. Поэтому по назначению врача в правильно подобранной дозировке пчелиный яд можно применять для лечения многих заболеваний. Но важно помнить, что это токсин и использовать его нужно с осторожностью.

    Как действует пчелиный яд:

    • под воздействием ферментов токсина расширяются кровеносные сосуды, что способствует быстрому проникновению токсинов в ткани; снижается АД;
    • происходит сенсибилизация организма;

    важно: аллергическая реакция может проявиться при повторной процедуре;

    Все свойства токсинов пчел сохраняются в таких готовых продуктах, как крем-воск Здоров или, например, мазь Апизатрон.

    Специалисты и пациенты отмечают эффективность, удобство применения и отсутствие побочных эффектов популярного продукта на российском рынке – крем-воска от компании Здоров.

    Польза пчелиного яда для человека

    Пчелолечение издавна применяется в медицине. Польза пчелиного яда для человека:

    • устранение воспаления, боли;
    • рассасывание рубцов и спаек;
    • улучшение местного кровообращения и обмена веществ, восстановление измененных тканей;
    • антисептическое, противовоспалительное и омолаживающее воздействие на кожу;
    • восстановление хрящевой ткани при обменно-дистрофических поражениях суставов и позвоночника (артрозах и остеохондрозах);
    • предупреждение тромбообразования и связанных с ним осложнений – инфарктов миокарда, инсультов, тромбофлебитов, тромбоэмболий (отрывов тромба с последующей закупоркой им крупных магистральных сосудов);
    • активизация иммунитета, повышение аппетита, нормализация процесса сон – бодрствование;
    • восстановление двигательных нарушений после перенесенного инсульта.

    Применение пчелиного яда рекомендуется при:

    • невралгических болях, связанных с ущемлением или воспалением нервов;
    • обменно-дистрофических заболеваниях суставов и позвоночника – для устранения боли, улучшения кровообращения и восстановления хрящевой ткани;
    • ревматических поражениях – для устранения воспаления и боли;
    • мышечных болях, вызванных различными заболеваниями и травмами, а также при растяжении сухожилий;
    • лечении варикоза и геморроя – пчелиный яд помогает снимать воспаление, боль, предупреждает образование тромбов, тонизирует стенки вен;
    • лечении простатита;
    • в косметологии пчелиный яд применяют:
      • в составе мезотерапии для омоложения кожи, устранения рубцов – инъекции пчелиного яда;
      • в составе кремов для омоложения и проблемной кожи — крем с пчелиным ядом и прополисом для проблемной кожи лица от фирмы Здоров и др.
    • пчелиный яд используют в составе комплексного лечения псориаза и некоторых других видов хронического дерматита;
    • для разогревания мышц во время тренировок.

    Пчелиный яд имеет не только полезные свойства, но и противопоказания. К ним относятся:

    • повышенная чувствительность организма к компонентам апитоксина;
    • онкологические заболевания и быстрорастущие доброкачественные опухоли;
    • любые острые заболевания и обострения хронических заболеваний;
    • тяжелые болезни внутренних органов с нарушением их функций;
    • анемия – токсины пчел разрушают красные клетки крови;
    • стабильно высокое АД – выброс в кровь большого количества гормонов кортизола и адреналина может способствовать подъему АД;
    • периоды вынашивания ребенка и лактации, детский возраст;
    • нарушения психики.

    Сколько в организме держится пчелиный яд

    Фармакокинетика (сколько действует пчелиный яд в организме человека) апитоксина точно не известна. Но большинство специалистов считает, что действие апитоксина индивидуально и зависит от физиологических особенностей и патологических процессов в организме.

    В среднем местное действие (боль, покраснение, отек) апитерапии в виде ужаления пчёлами держится 1 – 5 дней в зависимости от индивидуальной чувствительности организма. Столько же держится пчелиный яд в организме человека. Выводится он через почки, поэтому при нарушении функции этого органа апитоксинотерапия противопоказана.

    Применение пчелиного яда в лечебных дозах оказывает благотворное воздействие на организм человека. Но действие его индивидуально, поэтому назначать лечение, подбирать вид воздействия и дозировку может только врач.

    Видео удалено.
    Видео (кликните для воспроизведения).

    Сюжет Первого канала о пчелином яде

    Исследование фосфолипазы из пчелиного яда
    Оценка 5 проголосовавших: 1

    ОСТАВЬТЕ ОТВЕТ

    Please enter your comment!
    Please enter your name here